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本制品是专用于探针法（TaqMan，Molecular Beacon等）实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含BaldStar Taq DNA Polymerase、PCRBuffer、dNTPs和Mg²⁺，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP基因型分析等，适用于不同类型探针法荧光定量。本制品含有的BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免了在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，可以检测单拷贝的模板。使用本制品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更准确。适用于无需ROX作为校正染料的所有荧光定量PCR仪。

• 不需要ROX校正的仪器（WE0144）：
  Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
  
• 需要Low ROX校正的仪器（WE0145）：
  ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio 3 System，QuantStudio 5 System，QuantStudio 6 Flex System，QuantStudio 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
  
• 需要High ROX校正的仪器（WE0146）：
  ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

• 使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
  
• 避免反复冻融本制品，反复冻融可能使产品性能下降。本制品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

• 配制PCR反应体系
  

  成分	用量	终浓度
  2×BaldStar Probe PCR Mix	25μL	1×
  Forward Primer,10μM	1μL	0.2μM
  Reverse Primer,10μM	1μL	0.2μM
  Probe,10μM	1μL	0.2μM
  Template DNA	2μL
  50×ROX(可选)	1μL	1×
  ddH2O	至50μL

  注意：
  
  • 通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1～1.0μM作为设定范围的参考。
    
  • 使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
    
  • 通常DNA模板的量以10～100ng基因组DNA或1～10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
    
  • 不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX或50×High ROX或不加。
• 设置PCR反应程序
  注意：本制品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！
  两步法PCR：
  

  步骤	温度	时间	循环数
  预变性	95℃	10min	1
  变性	95℃	15 s	35～40
  退火/延伸	60℃	1min

  注意：
  
  • 本制品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10min条件下实现酶的活化。
    
  • 建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以56℃～64℃的范围作为设定参考。